Aplicación de la tecnología de detección de anticuerpos en el descubrimiento innovador de anticuerpos

 

Aplicación de la tecnología de detección de anticuerpos en el descubrimiento innovador de anticuerpos

Aplicación de la tecnología de detección de anticuerpos en el descubrimiento innovador de anticuerpos. El descubrimiento de anticuerpos incluye la detección de anticuerpos y la optimización de anticuerpos. Este artículo hace una comparación detallada de los procedimientos técnicos y las características de aplicación de los hibridomas, bibliotecas de anticuerpos de presentación de fagos, bibliotecas de anticuerpos de presentación molecular sin células, bibliotecas de anticuerpos de superficie celular y tecnologías de clonación de genes de células B.

Las bibliotecas de anticuerpos de presentación de hibridomas y fagos de ratón se utilizan ampliamente en la detección de anticuerpos debido a su madurez tecnológica y fluidez. La biblioteca de anticuerpos de presentación de expresión libre de células es adecuada para introducir mutaciones in vitro y añadir presión de detección; la biblioteca de anticuerpos de presentación de la superficie celular se puede usar para enriquecer de manera fina y muy alta anticuerpos de alta afinidad debido al uso de la tecnología de clasificación de flujo. Por lo tanto, estas dos tecnologías tienen ventajas únicas en la optimización de anticuerpos.

Por el contrario, la tecnología de clonación de genes de células B utiliza operaciones unicelulares de alto rendimiento (incluida la separación, el cribado, la PCR y la secuenciación de una sola célula), que requieren equipos, reactivos, consumibles y tecnología operativa más elevados, y el costo de la aplicación también el más alto. Además, es necesario acumular más experiencia de cribado unicelular y métodos para el cribado individual de dianas diversificadas, y llevará tiempo promover el cribado de anticuerpos en el futuro.

El descubrimiento de anticuerpos incluye dos procesos: detección y optimización de anticuerpos. El cribado de anticuerpos consiste en buscar anticuerpos candidatos de alta calidad desde el principio, y la optimización de anticuerpos consiste en realizar las mejoras necesarias en los anticuerpos existentes. El descubrimiento de anticuerpos es la única forma de desarrollar fármacos de anticuerpos monoclonales, fármacos de anticuerpos biespecíficos, fármacos ADC y fármacos de terapia de células Car-T.
Según la teoría de la selección clonal, la inmunidad animal enriquece los clones de células B dominantes in vivo; mientras que el cribado por afinidad in vitro o la clasificación celular (clasificación) enriquece los clones de anticuerpos dominantes in vitro.

Los inmunógenos naturales (como virus o células) son más fáciles de enriquecer en clones de células B in vivo que reconocen epítopos naturales que los inmunógenos preparados artificialmente (como polipéptidos o proteínas recombinantes); si se usan inmunógenos preparados artificialmente para inmunizar animales, inevitablemente generarán clones de células B que se enriquecen para reconocer epítopos no naturales porque los epítopos no naturales son más inmunogénicos. El indicador clave para el cribado de anticuerpos funcionales es más que la afinidad del anticuerpo.

El cribado por afinidad o la clasificación celular basada en la interacción antígeno / anticuerpo debe evitar el enriquecimiento excesivo de anticuerpos de alta afinidad y debe tener en cuenta la diversidad de afinidad y secuencia de anticuerpos y evitar perder clones de anticuerpos funcionales raros. Reducir adecuadamente la presión de detección y ampliar el rendimiento de la detección ayudará a mejorar la tasa de éxito de la detección de anticuerpos funcionales.

Los hibridomas y las bibliotecas de anticuerpos son las tecnologías de detección de anticuerpos más utilizadas. Después de la mejora continua de la tecnología de clonación de genes de una sola célula B, también se ha comenzado a utilizar para la detección de anticuerpos. Los hibridomas incluyen tecnología de hibridomas de ratón, rata, hámster y conejo; las bibliotecas de anticuerpos incluyen bibliotecas de anticuerpos de presentación de fagos, bibliotecas de anticuerpos de presentación de moléculas libres de células (presentación de ribosomas, presentación de ARNm y bibliotecas de anticuerpos de presentación de ADN) y bibliotecas de anticuerpos de presentación de superficie celular (presentación de superficie bacteriana, presentación de superficie de hongos, presentación de superficie de levadura y superficie de célula de mamífero mostrar biblioteca de anticuerpos). Compara los procedimientos operativos de varias tecnologías de detección de anticuerpos.

 

1. Hibridoma

Hasta ahora, la tecnología de hibridomas se ha desarrollado muy madura. El llamado hibridoma no es solo una célula híbrida seleccionada en un medio limitado después de la fusión de células B con capacidad de secreción de anticuerpos y capacidad de proliferación infinita de células de mieloma in vitro, tiene tanto capacidad de secreción de anticuerpos como capacidad de proliferación in vitro infinita. Los hibridomas solo tienen el proceso de enriquecimiento in vivo producido por inmunidad y no existe un proceso de enriquecimiento in vitro.

Durante el cribado, el sobrenadante del cultivo de células de hibridoma puede detectarse directamente para completar el cribado preliminar. Los hibridomas de ratón pueden preparar directamente anticuerpos monoclonales purificados de ascitis de ratón; los hibridomas de rata, hámster y conejo no pueden preparar ascitis, y las células de hibridoma deben cultivarse in vitro para purificar los anticuerpos monoclonales; todas las especies de hibridomas pueden clonarse o clonarse a partir del cribado inicial. El gen del anticuerpo se clona en las células subclonadas, se lleva a cabo la transformación molecular y se expresa y purifica el anticuerpo monoclonal recombinante. Una vez que se purifica el anticuerpo monoclonal, el anticuerpo funcional se puede cribar e identificar mediante una evaluación funcional meticulosa.

La eficiencia de la electrofusión celular para preparar hibridomas es muy alta y las células B de cada ratón pueden producir hasta 2-4 × 10 ^ 4 clones candidatos de hibridoma. Sin embargo, dado que cada célula de hibridoma es producto de la fusión de células B y células de mieloma, es inestable durante la división celular y pierde fácilmente la capacidad de producir anticuerpos. Por lo tanto, debe subclonarse para aislar hibridomas secretores de anticuerpos estables. clon. Durante la subclonación, es fácil que los clones positivos se vuelvan negativos en la selección inicial.

Por lo tanto, completar la clonación de genes antes de la subclonación puede evitar perder los genes de anticuerpos de los clones positivos en la selección inicial. La ventana de tiempo antes de la subclonación es muy corta y el número de células es pequeño, lo que limita el flujo de clonación de genes y conversión molecular antes de la subclonación y reduce la tasa de detección exitosa de anticuerpos funcionales. Por lo tanto, el uso de un enfoque de hibridoma para cribar anticuerpos funcionales generalmente requiere la inmunización de múltiples animales y, a veces, inmunizaciones repetidas debido a la fusión o al fallo de la detección. Esto es especialmente cierto cuando se desarrollan fármacos de anticuerpos contra objetivos difíciles.

 

2. Biblioteca de anticuerpos

2.1 Tipos de bibliotecas de anticuerpos

Según la fuente y el uso de los genes de anticuerpos, las bibliotecas de anticuerpos se dividen en dos categorías: bibliotecas de anticuerpos inmunes y bibliotecas de anticuerpos generales. Los genes de anticuerpos de la biblioteca de anticuerpos inmunes se derivan de células B humanas o animales inmunizadas (ganglios linfáticos, bazo y linfocitos de sangre periférica). La biblioteca general de anticuerpos se divide en biblioteca de anticuerpos naturales, biblioteca de anticuerpos completamente sintéticos y biblioteca de anticuerpos semisintéticos. Según las diferentes formas de moléculas de anticuerpos, la biblioteca de anticuerpos se puede dividir en tres tipos principales: biblioteca de anticuerpos Fab, biblioteca de anticuerpos scFv y biblioteca de anticuerpos VHH. La biblioteca de anticuerpos VHH también se denomina biblioteca de nanoanticuerpos.

Los genes de anticuerpos de la biblioteca de anticuerpos naturales se derivan de células B humanas o animales no inmunizadas. Según la teoría de la selección clonal de la producción de anticuerpos, una vez que maduran los órganos fetales, la selección clonal provocará el sesgo de la clonación de células B. Hay un gran número de clones de células B1 y B2 que no se han clonado en el hígado y la médula ósea fetal, y la diversidad de anticuerpos es mayor. Por lo tanto, es la mejor opción para crear una biblioteca de anticuerpos naturales. Dado que las células B en los ganglios linfáticos, el bazo y los linfocitos de sangre periférica se han sometido a una selección clonal in vivo, es necesario recolectar más donantes para cubrir la mayor diversidad de anticuerpos posible.

De acuerdo con el principio de reordenamiento del gen del anticuerpo, las interfaces V y D de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, el fragmento del gen D y las interfaces D y J juntas constituyen la CDR3 de la cadena pesada, que también es HCDR3; las interfaces V y J de la región variable de la cadena ligera son. Constituye la CDR3 de la cadena ligera, que es LCDR3. La diversidad combinada de diferentes grupos de genes V, D y J, la incertidumbre en la interfaz durante el reordenamiento de genes y las mutaciones somáticas que cubren los genes de la región variable del anticuerpo, más la diversidad combinada de cadenas pesadas y ligeras, son comunes. constituye toda la fuente de diversidad de anticuerpos. En la interacción entre el antígeno y el anticuerpo, la región variable de la cadena pesada es más importante que la región variable de la cadena ligera. y la diversidad de HCDR3 es la más alta, por lo que HCDR3 es la que más contribuye. La Figura 2 muestra la relación correspondiente entre el reordenamiento del gen de la región variable del anticuerpo, la secuencia primaria de la región variable del anticuerpo y la estructura del anticuerpo.

Figura 2. La relación correspondiente entre el reordenamiento del gen de la región variable del anticuerpo, la secuencia primaria de la región variable del anticuerpo y la estructura del anticuerpo

Basándose en el análisis detallado de la secuencia y estructura del anticuerpo, la región variable de la cadena pesada del anticuerpo y la región variable de la cadena ligera se dividieron en 7 grupos. Combinar los aminoácidos que aparecen con más frecuencia en cada posición de la región variable en una secuencia, es decir, secuencia consenso. Usando métodos bioinformáticos, se predijeron los aminoácidos en cada posición en las 6 regiones CDR de la región variable del anticuerpo y se diseñaron 6 bibliotecas de péptidos CDR. La secuencia consenso de la cadena pesada y la cadena ligera se combina aleatoriamente para generar 49 conjuntos de secuencias de esqueleto y luego se incluye con seis bibliotecas de péptidos CDR para diseñar bibliotecas de anticuerpos scFv o Fab. Este es el principio de diseño de la biblioteca de anticuerpos completamente sintéticos completamente humanos de Morphosys (HuCAL). Sobre esta base, después de esta serie de operaciones de optimización,

Natural antibody libraries and fully synthetic antibody libraries have their own advantages and disadvantages. The antibody genes of the natural antibody library are derived from natural B cells, and the diversity of epitopes is relatively limited, which also affects the affinity of the antibodies to be screened. However, due to the in vivo evolution process, indicators such as stability, solubility and expression levels perform better. In contrast, the design diversity of the fully synthetic antibody library reaches more than 10^20. Even if the bacterial transformation step is restricted during the construction of the antibody library, the diversity of antibody recognition epitopes far exceeds that of the natural antibody library. However, this kind of artificially designed sequence diversity has not undergone in vivo evolution. It often occurs with abnormal protein modification or abnormal amino acid clusters, low expression levels and easy degradation. Therefore, the antibodies screened out need to be optimized for the necessary antibodies to be more patented. Sex.

La biblioteca de anticuerpos semisintéticos está diseñada para integrar las ventajas de la biblioteca de anticuerpos naturales y la biblioteca de anticuerpos completamente sintéticos, y tratar de superar sus deficiencias. Los fragmentos del gen FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3 de la región variable del anticuerpo se derivan todos de células B naturales, mientras que la región CDR3 y FR4 se sintetizan artificialmente. La composición de aminoácidos y la proporción de cada posición en la región CDR3 también están diseñadas por tecnología bioinformática. Por lo tanto, la biblioteca de anticuerpos semisintéticos no solo reduce la proporción de diseño artificial, sino que también asegura una diversidad de anticuerpos suficiente.

 

2.2 Comparación de bibliotecas de anticuerpos basadas en diferentes tecnologías de visualización

Según las diferentes tecnologías de presentación, las bibliotecas de anticuerpos se dividen en tres categorías: bibliotecas de anticuerpos de presentación en fagos, bibliotecas de anticuerpos de presentación de moléculas libres de células y bibliotecas de anticuerpos de presentación en la superficie celular. La biblioteca de anticuerpos de presentación molecular libre de células se puede dividir en tres tipos: presentación de ribosomas, presentación de ARNm y biblioteca de anticuerpos de presentación de ADN. Según las diferentes células huésped, la biblioteca de anticuerpos de presentación en la superficie celular se puede dividir en cuatro tipos: presentación en la superficie bacteriana, presentación en la superficie de los hongos, presentación en la superficie de la levadura y biblioteca de anticuerpos de presentación en la superficie de la célula de mamífero.

Debido a las limitaciones de la eficiencia de transformación, la densidad del cultivo celular y el volumen del cultivo celular, el límite superior de la capacidad de almacenamiento de la biblioteca de anticuerpos de exhibición de la superficie celular (especialmente la biblioteca de anticuerpos de exhibición de la superficie celular de mamíferos) es relativamente pequeño (generalmente menos de 10 ^ 9 ). Durante el cribado, los clones de células individuales generalmente se enriquecen y separan mediante clasificación celular, seguido de PCR de células individuales de alto rendimiento para clonar genes de anticuerpos y realizar la transformación molecular, y luego expresar y purificar los anticuerpos recombinantes para el cribado e identificar anticuerpos funcionales.

Debido a que la clonación de genes y la conversión molecular están limitadas por el rendimiento operativo, el rendimiento de la expresión, purificación y rastreo funcional de anticuerpos recombinantes candidatos es limitado. Cuanto menor sea el rendimiento, más fácil será perder clones de alta calidad. Entre las diversas bibliotecas de anticuerpos de presentación de la superficie celular, las células de levadura y de mamífero tienen mecanismos de síntesis de proteínas más maduras, que son más propicias para mostrar anticuerpos que están cerca de sus conformaciones naturales. La actividad de unión de los anticuerpos seleccionados de las correspondientes bibliotecas de anticuerpos de presentación de la superficie celular es mejor. Refleja la actividad de los anticuerpos naturales. Dado que el límite superior de la capacidad de almacenamiento de la biblioteca de anticuerpos de presentación de la superficie celular es relativamente pequeño, y la clasificación celular es fácil para enriquecer anticuerpos de alta afinidad,

La construcción de la biblioteca de anticuerpos de presentación molecular libre de células solo requiere la preparación de la plantilla de ADN correspondiente in vitro, y el paso de transformar bacterias o células es completamente innecesario, por lo que el límite superior de la capacidad de almacenamiento es el más grande, incluso mayor que 10 ^ 16. La biblioteca de anticuerpos almacenada en forma de ADN necesita someterse a operaciones de amplificación por PCR, transcripción in vitro y traducción in vitro antes de la selección para realizar la correlación entre el genotipo del anticuerpo (ARN o ADN) y el fenotipo (proteína). El cribado por afinidad se utiliza generalmente para completar el enriquecimiento in vitro durante el cribado.

Después de la amplificación por PCR policlonal y la conversión molecular policlonal, las bacterias se transforman y los clones individuales se seleccionan, y las células procariotas o células de mamífero se utilizan cuando el huésped expresa el anticuerpo recombinante. Finalmente, el anticuerpo no purificado se utiliza para la selección preliminar y el anticuerpo purificado se utiliza para completar la selección e identificación de anticuerpos funcionales. Dado que el paso de cribado de afinidad se completa por completo en un entorno in vitro sin células, es más fácil agregar presión de cribado (como temperatura, pH, concentración de sal, concentración de detergente, etc.), por lo que tiene una optimización única en el aspecto físico. y propiedades químicas de los anticuerpos Advantage. El paso de la PCR policlonal obviamente aumentará el número de copias del monoclonal, lo que requiere una conversión molecular posterior,

Debido al tamaño más pequeño del hospedador bacteriano y las partículas del fago, la gran densidad de cultivo y el pequeño volumen, y la eficiencia de la transformación bacteriana también es mayor que la de las células de levadura y de mamífero, la capacidad de almacenamiento límite de la biblioteca de anticuerpos de presentación de fagos está entre la biblioteca de anticuerpos de presentación de la superficie celular y la presentación molecular libre de células Entre las bibliotecas de anticuerpos, el límite superior es generalmente 10 ^ 11-10 ^ 12, que es suficiente para cumplir con los requisitos de aplicación de las bibliotecas de anticuerpos inmunes y anticuerpos generales.

La biblioteca de anticuerpos de presentación en fagos también se enriquece in vitro mediante cribado de afinidad, y luego se detecta la actividad del anticuerpo de presentación en fagos o de los fragmentos de anticuerpos expresados ​​y secretados por procariotas para completar la selección preliminar. Las partículas de fagos permiten el almacenamiento a largo plazo y facilitan el cribado de alto rendimiento. Y el enlace de conversión molecular es simple y fácil. En comparación con los otros dos tipos de tecnologías de detección de bibliotecas de anticuerpos, las ventajas de la biblioteca de anticuerpos de presentación en fagos se resumen a continuación: gran capacidad de almacenamiento, operación simple, bajo costo, adecuada para alto rendimiento y beneficiosa para la detección de anticuerpos funcionales. En base a esto, la biblioteca de anticuerpos de presentación de fagos se ha convertido en una de las técnicas principales para la detección de anticuerpos.

 

3. Comparación de la biblioteca de anticuerpos y el hibridoma

Como tecnología de detección de anticuerpos comúnmente utilizada, las bibliotecas de anticuerpos de presentación de hibridomas y fagos tienen sus propias características y ventajas.

La cadena pesada y la cadena ligera de los anticuerpos monoclonales de hibridoma se derivan de una célula B, que es un emparejamiento natural. La biblioteca de anticuerpos es el producto de una combinación aleatoria de cadenas ligeras y pesadas de diferentes células B. Por un lado, las cadenas pesadas y ligeras emparejadas de forma no natural pueden afectar la actividad del anticuerpo, pero por otro lado, también aumenta la diversidad de la biblioteca de anticuerpos y ayuda a optimizar la actividad del anticuerpo. Incluso para los anticuerpos monoclonales de hibridoma, en la etapa de optimización de anticuerpos, las estrategias de reemplazo de cadena se utilizan a menudo para optimizar la combinación de apareamiento de cadenas ligeras y pesadas, mejorar la afinidad del anticuerpo y optimizar otras funciones del anticuerpo.

Las bibliotecas de anticuerpos de presentación de hibridomas y fagos se utilizan en el descubrimiento de anticuerpos, lo que requiere que los usuarios tengan diferentes reservas técnicas. Los hibridomas de ratón no necesitan pasar por los pasos de clonación de genes, conversión molecular y expresión de anticuerpos recombinantes. Solo necesitan pasar por inmunización animal, cultivo celular y fusión celular, preparación de ascitis de ratón y purificación de anticuerpos monoclonales para completar el cribado preliminar y la identificación funcional de anticuerpos.

Los requisitos técnicos son relativamente sencillos. Los hibridomas de ratas, hámsteres y conejos no pueden preparar ascitis, o pueden cultivarse in vitro para purificar los anticuerpos, o pueden clonarse y transformarse molecularmente para expresar y purificar anticuerpos recombinantes. Esto aumenta la dificultad técnica y la complejidad, así como también. El rendimiento del cribado es limitado y los clones de alta calidad se pierden fácilmente. En comparación, además de la inmunidad animal y los inmunoensayos, los anticuerpos de presentación en fagos son sistemas de tecnología de ingeniería completamente genética, que incluyen la construcción de bibliotecas, la conversión molecular y la expresión y purificación de anticuerpos recombinantes.

Por lo tanto, la promoción y aplicación de bibliotecas de anticuerpos de presentación en fagos están estrechamente relacionadas con el desarrollo y la madurez de la tecnología de anticuerpos por ingeniería genética.

La biblioteca de anticuerpos es una combinación de un conjunto completo de tecnología de clonación de genes de anticuerpos y tecnología de visualización de superficie de anticuerpos. Cuando se utilizan bibliotecas de anticuerpos, la inmunización animal, la construcción de la biblioteca de anticuerpos y el cribado de anticuerpos son enlaces independientes. Después de la inmunización, es suficiente retener las células B o los ácidos nucleicos para la futura construcción de la biblioteca, sin necesidad de retener animales o células vivas; una vez que se construye la biblioteca de anticuerpos, se puede almacenar de forma permanente, sin necesidad de inmunización repetida ni creación de biblioteca, lo que permite la detección repetida; Cada gen de anticuerpo se clona individualmente y sufre directamente una transformación molecular. Estas son las principales ventajas que distinguen las bibliotecas de anticuerpos de los hibridomas. Los clones candidatos de hibridomas no pueden ser estables durante mucho tiempo, y la ventana de tiempo para el cribado primario y la subclonación es muy corta. A veces, se requieren inmunizaciones, fusiones y pruebas de detección repetidas, lo que requiere tiempo y esfuerzo.

El amplio espectro de especies de la biblioteca de anticuerpos también es su ventaja. Sus genes de anticuerpos no solo se derivan de especies animales de ratón, rata, hámster y conejo que pueden producir hibridomas, sino que también incluyen humanos, primates no humanos, camellos, alpacas, tiburones, pollos y otras especies que no pueden realizar una fusión celular efectiva debido a falta de líneas celulares de mieloma adecuadas. En teoría, solo es necesario utilizar la secuenciación del transcriptoma y otros medios técnicos para obtener la secuencia del gen del anticuerpo, luego se pueden diseñar cebadores para clonar el conjunto completo de genes del anticuerpo de la especie, y también se puede construir una biblioteca de anticuerpos para cribar anticuerpos.

 

 

4. Tecnología de clonación de células B individuales

Básicamente, una tecnología de clonación de genes de anticuerpos de células B es una tecnología de visualización de la superficie de células B. Las células B naturales no pueden sobrevivir y expandirse indefinidamente in vitro. Solo cuando se utilizan tecnologías de aislamiento de una sola célula, cribado de una sola célula, PCR de una sola célula o secuenciación de una sola célula de manera integral, se puede realizar una detección preliminar de alto rendimiento y obtener diferentes células B en un período de tiempo corto. Genes de anticuerpos clonados por células.

Solo con una conversión molecular de alto rendimiento se puede completar la evaluación detallada, la identificación y el cribado de anticuerpos funcionales. La clave aquí es cómo diseñar un método de detección unicelular de alto rendimiento de acuerdo con los requisitos de detección de anticuerpos funcionales para reducir la escala y el rendimiento de las operaciones candidatas. Berkeley Light lanzó el dispositivo Beacon para resolver la separación y el cribado de una sola celda de alto rendimiento, pero el equipo es demasiado caro, el costo de los consumibles es demasiado alto y los métodos y estrategias de cribado de una sola celda son demasiado simples para ser enriquecido.

En la actualidad, esta tecnología se utiliza ampliamente en el cribado de anticuerpos contra enfermedades infecciosas virales (como el cribado de nuevos anticuerpos neutralizantes de coronavirus), y la promoción y aplicación de cribado de anticuerpos funcionales relativamente complejos en el futuro aún no se ha probado en la práctica. .

 

5. Optimización de anticuerpos

El descubrimiento de anticuerpos también incluye áreas de optimización de anticuerpos como humanización, maduración por afinidad y optimización de propiedades físicas y químicas. La optimización de anticuerpos es una especie de evolución dirigida molecular. Primero construya una variedad de bibliotecas de anticuerpos mutantes (incluidas las bibliotecas de anticuerpos de presentación de fagos, las bibliotecas de anticuerpos de presentación de la superficie celular o las bibliotecas de anticuerpos de presentación de moléculas libres de células), y luego use el cribado de afinidad, la clasificación de células u otros indicadores biológicos, físicos o químicos basados ​​en cribado especial métodos para cribar y optimizar determinadas características de los anticuerpos.

El diseño y la construcción de bibliotecas de anticuerpos mutantes pueden utilizar mutación aleatoria (mezcla de ADN o PCR propensa a errores), mutación dirigida al sitio o mutación de región local y mezcla de cadena (mezcla de cadena) y otras estrategias de mutación y medios técnicos. Como se mencionó anteriormente, la tecnología de presentación molecular sin células no solo es adecuada para introducir mutaciones a nivel molecular, sino que también es conveniente para agregar diferentes presiones de detección en el proceso de detección según los indicadores de optimización.

La presentación de la superficie celular utiliza principalmente estrategias de clasificación de células para enriquecer clones de alta afinidad in vitro, que es más adecuado para la maduración de la afinidad de anticuerpos. En la práctica, puede elegir entre tres bibliotecas de anticuerpos diferentes según la capacidad de diseño de la biblioteca de anticuerpos mutantes. La capacidad de almacenamiento de la presentación de moléculas libres de células es la más grande (el límite superior es 10 ^ 16), y la capacidad de almacenamiento del anticuerpo de presentación de fagos está en el medio (el límite superior es 10 ^ 10-10 ^ 12), la célula la biblioteca de anticuerpos de visualización de superficie tiene la capacidad de almacenamiento más pequeña (el límite superior es menos de 10 ^ 9).

 

6. Conclusión

En resumen, el descubrimiento de anticuerpos es un sistema técnico integral que incluye inmunidad animal, clonación molecular, pruebas inmunológicas, producción de proteínas, evaluación de la función celular y pruebas con animales. Entre las diversas tecnologías de cribado, las bibliotecas de anticuerpos de presentación de fagos y los hibridomas tienen sus propias características y ventajas, y son las más utilizadas. Otras tecnologías de detección también han florecido debido a su singularidad.

En el proceso de desarrollo de fármacos de anticuerpos, el descubrimiento de anticuerpos requiere una investigación en profundidad sobre la individualidad de cada objetivo. De acuerdo con los requisitos de aplicación específicos del tratamiento de enfermedades, y bajo la premisa de comprender la naturaleza científica de la diana, se pueden usar racionalmente varias tecnologías de detección de anticuerpos para desarrollar fármacos de anticuerpos. Proporcione anticuerpos funcionales candidatos de alta calidad.

 

 

(fuente: internet, solo referencia)